来源:发布时间:2024-01-30 11:03:04点击率:
从生物电镜发展趋势上看,一类是体电镜,另一类是Cryo-ET。为了证明线粒体囊只包含一种细胞器,只切一层就说明有特异性并不客观(切的角度也会影响这种形态的判断),体电镜就作为这种膜性细胞器检测的金标准非常重要,利用蔡司体电镜技术,我们总共分析了300多个囊泡,每一个只包含一种线粒体,首次在精子里面,直接把细胞里面的线粒体绝对数量、体积、形态,完整重构出来。
用电镜证明线粒体囊的纯度很难,因为分离的线粒体囊本身又小又少,随机切很容易丢失。而电镜制样涉及到很多化学固定和重金属染色,所有的膜结构都被染成黑色,这时肉眼或者光镜是无法找到目标样品在哪儿,这一步就成了当时电镜采图的限速步骤。刘鹏博士引入了蔡司X射线显微镜Xradia 520(查看更多)之后,可以精确的定位到目标样品的位置,效率大幅度提升。
蔡司X射线显微镜Xradia 520和搭载体电镜技术的蔡司扫描电镜Gemini300联用,X射线显微镜精确定位大幅度提升了电镜制样的效率。利用Gemini 300进行高分辨率高衬度成 三维重构精细胞结构和线粒体囊的分泌,定量细胞内线粒体的绝对数量。
▲通过搭载体电镜技术的蔡司场发射扫描电镜Gemini300定量细胞内线粒体的绝对数量,结果显示平均每个成熟精子中含有57个线粒体,而精细胞中约含有90个线粒体,平均减少了33个线粒体。这些数据证明此前的设想,线虫精子发育过程中,其线粒体数量确实受到严格调控,维持在一个合适范围内。
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